Исследование пролиферативной активности и экспрессии генов (col1a1, mmp1a, mmp1b, mmp3, vcan, eln) в фибробластах после воздействия препаратов коллагена

Моржанаева М.А., Свечникова Е.В., Бабин Ю.Ю., Старкина О.В.

ООО «Бьюти Эксперт Медикал», Москва
ФГБУ «Поликлиника &¹85;1» Управления делами Президента Российской Федерации, Москва
Медицинский институт непрерывного образования ФГБОУ ВО «РОСБИОТЕХ», Москва
ООО «Мелситек», генетическая лаборатория «Melsytech Genetics», Нижний Новгород

Цель исследования: оценить жизнеспособность и пролиферативную активность фибробластов, а также экспрессию генов (коллаген первого типа (COL1), эластин (ELN), матриксная металлопротеиназа 1-го типа (MMP1), матриксная металлопротеиназа 3-го типа (MMP3) и верзикан (VCAN)) после воздействия шести препаратов коллагена.
Материалы и методы исследования. Для измерения жизнеспособности, пролиферации и цитотоксичности клеток использовался стандартный МТТ-тест. Экспрессию генов измеряли с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией (RT-rtPCR).
Результаты. В результате анализа полученных данных мы выявили, что эффективность исследуемых препаратов не зависит от концентрации коллагена в конечном растворе. Так, по результатам MTT (метилтиазолилдифенил-тетразолиум бромид)-теста наибольшая пролиферативная активность наблюдалась для фибробластов, которые обрабатывали препаратом Collost micro. Для препарата Linerase через 48 часов наблюдается более высокая экспрессия коллагена по сравнению с остальными препаратами. Необходимо отметить отсутствие экспрессии гена mmp1 спустя 24 часа во всех образцах кроме проб, обработанных препаратами Collapro30+ и Collapro55+. Спустя 48 часов после обработки клеток экспрессия гена mmp1 детектировалась только в образце, обработанном препаратом Linerase. Результаты попарного сравнения отличий экспрессии между группами по гену MMP3 (24 часа и 48 часов после инкубации) выявлено не было. Также в образцах, обработанных препаратами Collapro30+, Collapro45+ и Collapro55+, верзикан экспрессируется на более высоком уровне на первые сутки исследования. В свою очередь на вторые сутки верзикан экспрессируется на более высоком уровне у препаратов Collapro45+ и Linerase.